Infeksi bronkitis (IBV) menyebabkan kerugian ekonomi
Bronkitis Menular (IBV)
Menurut Artria virus bronkitis virus unggas yang mematikan (IBV) diisolasi dari ayam broiler berusia 30 hari yang menunjukkan gejala pernapasan, lesi nefropatologis, dan proporsi kematian yang tinggi di Republik Rakyat Tiongkok selama tahun 2005. Jenis ini, yang disebut YN, secara genetik dan ditandai secara patologis. Analisis filogenetik menunjukkan bahwa YN dan sebagian besar isolat IBV yang dikarakterisasi sebelumnya yang ditemukan di Cina secara filogenetik diklasifikasikan menjadi 2 kelompok genetik utama. Isolat YN menyebabkan lesi parah dan mengakibatkan kematian 65% pada infeksi eksperimental dari ayam bebas-patogen spesifik 30 hari. Lesi trakea dan ginjal yang parah terjadi pada semua unggas yang terinfeksi, yang menegaskan kemampuan strain YN untuk menginduksi penyakit pernapasan dan ginjal. Antigen IBV dideteksi dengan analisis imunohistokimia di trakea, paru-paru, ginjal, dan bursa, konsisten dengan pengamatan histopatologis, isolasi virus, dan deteksi PCR transkripsi terbalik. Kami menunjukkan bahwa YN IBV menunjukkan patogenisitas yang parah pada ayam, dan bahwa virus yang serupa lazim di Cina. bronchitis Virus (IBV), anggota keluarga Coronaviridae, memesan Nidovirales, menyebabkan pernafasan yang sangat menular dan kadang-kadang penyakit urogenital pada ayam yang ditandai dengan tanda-tanda pernapasan, nefritis, atau berkurangnya produksi telur dan kualitas pada ayam layer. IBV adalah patogen unggas utama yang endemik di seluruh dunia dan menyebabkan kerugian ekonomi yang serius. Metode utama untuk melindungi unggas dari infeksi bronkitis (IB) adalah pemberian vaksin hidup atau mati. Namun, IB terus menyebabkan kerugian ekonomi di industri perunggasan meskipun program vaksinasi intensif di banyak negara ( 1 - 5 ). Wabah IB sering disebabkan oleh infeksi dengan strain yang secara serologis berbeda dari yang digunakan untuk vaksinasi ( 2 , 6 ). Sejak IBV pertama kali dijelaskan pada tahun 1931, sejumlah besar serotipe atau varian telah muncul, dan beberapa telah menjadi endemik di seluruh dunia ( 4 , 7 - 12 ). Bahwa sedikit atau tidak ada proteksi silang terjadi antara serotipe IBV yang berbeda telah diketahui ( 13). Oleh karena itu, penentuan serotipe epidemi yang terus-menerus dan produksi vaksin generasi baru sangat penting untuk mengendalikan IB di setiap wilayah geografis atau negara. IBV pertama kali diisolasi di Republik Rakyat Tiongkok pada awal 1980-an; sejak saat itu, vaksin IB jenis-jenis Massachusetts (misalnya, H120, H52, Ma5, W93, dan 28/86) atau Connecticut yang dilemahkan hidup dan vaksin emulsi minyak yang tidak aktif yang telah dimatikan telah digunakan untuk mencegah dan mengendalikan penyakit. Namun, serotipe vaksin yang digunakan telah secara epidemiologis ditentukan berbeda dari isolat IBV dominan di Cina yang membentuk 2 kelompok besar strain unik, yang dinamai strain A2-like dan QXIBV-like
Oleh karena itu, karena kurangnya vaksin terhadap jenis IBV endemik di Cina, infeksi IBV tetap menjadi masalah di industri perunggasan Cina. Kami mengisolasi strain IBV yang mematikan dari ayam broiler berusia 30 hari di Provinsi Yunnan dan mengkarakteristikannya dengan menggunakan urutan keselarasan, analisis filogenetik, studi patogenisitas, pengamatan histopatologis, dan pemeriksaan imunohistokimia (IHC). Hasil penelitian menunjukkan bahwa isolat secara genetik mirip dengan sebagian besar strain IBV lazim ditemukan di Cina. Kami juga menunjukkan bahwa isolat IBV YN menampilkan patogenisitas yang lebih parah daripada strain yang ditandai sebelumnya di Cina. Pergi ke: Metode Virus dan Hewan Strain YN diisolasi pada tahun 2005 dari ayam broiler berusia 30 hari yang telah diinokulasi secara okular dengan vaksin H1V dari IBV pada hari pertama, 7, dan 21, masing-masing. Burung-burung yang sakit memiliki tanda-tanda pernapasan, penyakit ginjal yang parah, dan tingkat kematian 30%. Virus ini diperbanyak dalam telur ayam berembrio spesifik-patogen-bebas (SPF) 10 hari pada suhu 37 ° C selama 40 jam. Cairan alantoik diambil dari telur yang terinfeksi dan disimpan pada suhu -80 ° C. .
Ekstraksi RNA virus, Reverse Transcription PCR, dan Sequencing DNA Atas dasar urutan nukleotida IBV (M41, A2, BJ, ZJ971, dan SC021202; nomor aksesi GenBank. DQ834384 , AY043312 , AY319651 , AF352313 , dan AY237817 , masing-masing), 22 pasang primer spesifik ( Tabel 1)) dirancang untuk memperkuat genom lengkap (tidak termasuk segmen terminal 5′ dan 3′) dari strain YN. RNA virus diekstraksi dari cairan allantoic yang terinfeksi virus dengan menggunakan Trizol Reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) sesuai dengan instruksi pabrik. Reverse transcription (RT) dilakukan pada suhu 37 ° C selama 1 jam dengan menggunakan RNA total 3 μg, primer acak 1 μL (500 μg / mL, heksadeoksinukleotida acak; Promega, Madison, WI, USA) dan 0,5 μL M-MLV RT ( 200 U / μL) (Promega). Untuk PCR, 1 U Taq DNA Polymerase (Promega) dan 10 pmol dari masing-masing primer ditambahkan ke 100 ng cDNA sebagai templat dalam total volume reaksi 20 μL. PCR dilakukan pada 95 ° C selama 5 menit, diikuti oleh 35 siklus denaturasi (95 ° C, 45 detik), anil (53 ° C atau 55 ° C, 45 detik), dan polimerisasi (72 ° C, 2 menit) , dan langkah postpolimerisasi dilakukan pada 72 ° C s
